为评估一种改良稀释液对猪支原体肺炎活疫苗（株）临床效果的影响，使用猪支原体肺炎活疫苗（株），以普通稀释液稀释设作对照组，改良稀释液稀释设作试验组，开展了三项试验。即疫苗稀释后，在不同时间内测定疫苗效价；田间条件下经肋间注射接种7日龄仔猪后，测定血液中皮质醇、ACTH的浓度，称量并计算试验猪群7日龄至21日龄的平均日增重；监测仔猪接种后黏膜抗体SIgA的产生情况。结果显示，疫苗稀释后不同时间内，试验组株活疫苗的效价明显高于对照组，改良稀释液能更好地维持株活疫苗的菌体活性；接种7日龄仔猪后，试验组与对照组无明显临床异常反应，但试验组体内皮质醇、ACTH浓度明显低于对照组，且7～21日龄平均日增重比对照组高0.03kg/d；改良稀释液能有效提升株活疫苗的黏膜免疫应答水平。
关键词株活疫苗；普通稀释液；改良稀释液；猪支原体肺炎；
年，江苏省农科院从具有猪支原体肺炎典型临床症状和病理变化的号二花脸猪（中国地方品种，对猪肺炎支原体非常易感）体中分离与鉴定出一株猪肺炎支原体野菌株，并通过KM2培养基（改良的Friis培养基）连续在体外培养传代获得了一株猪肺炎支原体减毒菌株，命名为株，该菌株具有很好的安全性和免疫原性。株猪支原体肺炎活疫苗已在中国许多猪场取得了良好的免疫保护效果。
猪肺炎支原体无细胞壁，生长需求苛刻，故疫苗稀释液对维持活疫苗菌体活性可能至关重要。为达到最好的免疫保护效果，株活疫苗采用肺内（即肋间）注射接种途径，这对疫苗临床使用的安全性提出更高要求，而采用不同稀释液稀释的活疫苗临床安全性可能不同。株活疫苗使用不同疫苗稀释液稀释的临床效果可能不一样。因此，我们对一种改良后的疫苗稀释液，与普通（常规）稀释液进行了对比试验，以评估不同的疫苗稀释液对猪支原体肺炎活疫苗（株）临床效果的影响。
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1材料与方法
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1.1
试验材料
1.1.1疫苗与稀释液
猪支原体肺炎弱毒活疫苗（株），商品名为“诸欢畅”（生产批号，规格10头份/瓶），改良稀释液（生产批号，规格10mL/瓶），普通稀释液（生产批号，规格10mL/瓶），均由福州大北农生物技术有限公司提供。
1.1.2主要试剂
皮质醇ELISA检测试剂盒，促肾上腺皮质激素（ACTH）ELISA检测试剂盒，购自北京东雅生物制品有限公司；猪肺炎支原体SIgA-ELISA抗体检测试剂盒，由江苏省农业科学院兽医研究所提供。
1.2
试验背景
田间试验在两个猪场开展，分别为河南某猪场，基础母猪存栏约头（以下简称1场），广东某猪场（基础母猪存栏约头，以下简称2场）；两个猪场试验条件近似，均为商品外三元仔猪，一点式生产，全进全出饲养，仔猪试验期内所接种疫苗的种类相同。
1.3
试验设计与方法
1.3.1临床应激反应对比试验
分别在1场、2场各随机选取７日龄（同天分娩）外观健康的仔猪６窝，设立试验组和对照组，每窝猪一组，每组均设三个重复组（３窝），详情见表１。
所有试验组(用改良稀释液稀释）和对照组（用普通稀释液稀释）仔猪肋间注射“诸欢畅”1头份/头。
接种时及接种后1周内连续观察并记录所有猪只临床反应（体温、精神状况、哺乳情况等）；试验组、对照组仔猪分别在7、21日龄称重，并计算窝均重；分别在接种后1d（约2h）、7d、14d各随机采集试验组与对照组中6头仔猪（每个重复组2头）全血样品，分离血清并置-20℃冰箱冷冻保存。用夹心ELISA法测定所有血清样品中皮质醇、促肾上腺皮质激素（ACTH）浓度，并进行对比分析。
1.3.2影响株活疫苗菌体活性的对比试验
同时使用改良稀释液稀释诸欢畅疫苗（试验组）和普通稀释液稀释“诸欢畅”疫苗（对照组），在室温下放置一定时间后，按《质量标准》分别测定试验组与对照组疫苗稀释后30min、60min和min的效价（CCU），将试验结果进行对比分析。
1.3.3影响株活疫苗临床免疫效果的对比试验
试验设计见1.3.1。
1场、2场所有试验猪只分别于疫苗接种前（0d），接种后7d、14d、28d，采集鼻拭子样本，送江苏省农业科学院兽医研究进行检测。样品采集与检测参照冯志新等建立的方案，检测鼻拭子样本中黏膜抗体SIgA水平，对检测结果进行汇总统计。
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2结果与分析
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2.1
临床应激反应对比试验结果
接种后1h、24h内，试验组与对照组随机抽选部分仔猪进行体温监测，均未见异常体温反应。在免疫1周内，所有试验组与对照组仔猪精神状况和哺乳情况均未见明显异常。
7、21日龄各组试验猪窝均重结果见表2。
对试验组与对照组皮质醇检测结果分别求均值，汇总结果见图1、图2。结果发现，试验组猪只血清样本中皮质醇浓度明显低于对照组。
对试验组与对照组ACTH检测结果分别求均值，汇总结果见图3、图4。结果发现，在免疫后的1d、7d的ACTH水平并未出现明显降低，可能是由于试验期间频繁的采血所致。但组间差异显著，试验组猪只血清样本中ACTH浓度明显低于对照组。
2.2
影响株活疫苗菌体活性的对
比试验结果
试验组与对照组疫苗稀释后放置不同时间的测毒结果见表3。结果发现，对照组中猪支原体肺炎活疫苗（株）使用普通稀释液稀释后，在室温放置半小时后，疫苗效价开始下降；而试验组使用改良稀释液稀释后，在室温放置至1小时，效价无明显下降，放置至2小时后，效价开始下降。
2.3
影响株活疫苗临床免疫效果的
对比试验结果
对试验组与对照组猪只鼻拭子样本SIgA监测结果分别求阳性率，汇总结果见图5、图6。结果发现，试验组鼻拭子样本中SIgA转阳率比对照组快，且各监测点的阳性率比对照组高。
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3小结与讨论
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在现代规模养猪体系中，猪支原体肺炎作为一种高感染率的慢性消耗性疫病，严重影响饲料报酬，并在猪呼吸系统疾病中占据重要地位。因该病导致的重大经济损失倍受养猪业